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细胞治疗 “终末关卡”：固定床生物反应器中EOPC的高效回收新解法
发布日期：2025-11-12
近年来，细胞治疗成为生物医药领域增长最快的赛道之一。随着全球政策支持与技术迭代，尤其是基因编辑等突破性进展，多个细胞治疗产品已成功获批。细胞作为抗体、蛋白药物、疫苗及细胞与基因治疗的“母体”，其质量、稳定性与种属真实性贯穿于研发、生产与临床应用全周期。一旦使用交叉污染或误识别的细胞，将导致研究结论失真、结果不可重复，甚至临床治疗失败，带来不可估量的损失与患者安全风险。为此，国际顶尖期刊如Nature、Science、Cell等多次呼吁加强对细胞的系统鉴定。
值得注意的是，2025年版《中华人民共和国药典》已于10月1日正式实施，其中明确规定需对初级细胞库（MCB）、主细胞库（WCB）及生产终末细胞（EOPC）或生产限定代次细胞进行鉴别试验，以确认细胞身份纯正、无交叉污染。这一要求将极大推动生物医药行业的标准化与规范化发展。
生产终末细胞（End of Production Cell Bank, EOPC）是指细胞培养结束时从反应器中取样的细胞样本。其核心作用在于通过冻存生产末期的细胞状态，用于后续的遗传稳定性和安全性检测，确保整个生产过程中细胞未发生不良变异。因此，EOPC应当进行一次全面的检定，当生产工艺变更时，应重新对EOPC进行检定。EOPC通过建库可追溯每批次生产过程，确保产品可溯源性。具体细胞检定项目（表1)。
表1. 细胞检定的基本要求
注：“+”为必检项目，“－”为非强制检定项目。（+）表示需要根据细胞特性、传代历史、培养过程等情况评估后进行的检定项目。
a．EOPC，是指达到或超过生产末期时收获的细胞，尽可能取按生产规模制备的生产末期细胞。
b．对分枝杆菌易感的细胞进行该项检查。
c．根据风险评估结果确定是否进行体内试验，如在建库或细胞培养过程中存在外源因子引入的风险，可进行体内试验或用经验证的NGS法替代。
d．从MCB或WCB复苏细胞，扩增至或超过生产用细胞龄限制代次作为待检样本。
固定床生物反应器：
细胞规模化生产的优选平台
固定床生物反应器（Fixed Bed Reactor, FBR）凭借其剪切力低、培养密度高、环境均一、易于放大等优势，成为贴壁细胞规模化生产的首选平台，广泛应用于病毒疫苗、细胞治疗、外泌体等高端生物制品领域，其技术正朝着智能化与集成化方向持续发展。
同腾新创CEL-G® Culture Ad60固定床生物反应器（Ad60 FBR）通过三维结构设计增大了比表面积，促进细胞生长与物质交换，其固定化培养方式可有效降低剪切力，延长细胞存活时间，适于长期培养。这些特性使FBR在慢病毒、溶瘤病毒、外泌体等制备中展现出广阔前景。尤其值得关注的是，同腾新创Ad60 FBR在EOPC回收方面表现优异，成功突破了传统三维培养中细胞回收效率低的技术瓶颈，为细胞治疗全工艺闭环提供了关键支撑。
在传统的二维（2D）培养中，可通过细胞消化处理轻松获得EOPC，用于细胞鉴定。然而，在三维（3D）固定床生物反应器中，细胞在膜结构中固定良好，传统的消化回收工艺效率往往不如悬浮和2D贴壁培养。EOPC的回收面临更大的技术挑战，这也为后续的细胞检定与质量追溯增加了难度。为克服这一瓶颈，同腾新创开发了在Ad60 FBR上的EOPC回收工艺，能够获取足够用于EOPC检测的细胞数量，具体案例如下：
案例1. Ad60 FBR BT-2 UC-MSCs
生产外泌体的EOPC收获
UC-MSCs细胞在Ad60 FBR BT-2/FB-2（2 m2）中进行2次固定化培养实验，分别培养9天和16天，在下罐收获细胞上清后，进行EOPC回收实验，通过PBS清洗和胰酶消化25分钟处理。结果显示：第一次实验第9天回收细胞活率为90.0%，细胞总数为3.0E+07；第二次实验第16天回收细胞活率为89%，细胞总数为3.5E+07。这表明在Ad60 FBR长期3D培养中细胞仍保持较高的细胞活率和回收效率，为延长外泌体收获时间与工艺一致性提供了有力保障（图1）。
图1. UC-MSCs在Ad60 FBR BT-2的EOPC回收工艺流程和结果
案例2. Ad60 FBR BT-20 HEK293T
生产某种病毒载体的EOPC收获
HEK293T细胞在Ad60 FBR BT-20/FB-20（20 m2）中进行固定化培养。收获当天，对罐内细胞进行PBS清洗和胰酶消化处理。实验结果显示，细胞回收效果良好，回收细胞活率为90%，回收细胞总数为5.4E+08，完全满足后续检定所需（图2）。
图2. HEK293T在Ad60 FBR BT-20的EOPC回收工艺流程和结果
结论
细胞和基因治疗作为生物医药领域增长最快的赛道之一，对细胞质量、可追溯性和一致性提出了更高要求。EOPC作为细胞库体系的重要一环，不仅是监管合规的关键节点，更是保障产品质量、工艺变更评估和非临床研究数据可靠性的“黄金标准”。
固定床生物反应器因其高密度培养与低剪切力优势，成为CGT领域生产制备的理想平台。同腾新创Ad60 FBR通过UC-MSCs与HEK293T的实验证实，其在3D培养后能够实现EOPC的高效回收，细胞活率高且收获量充足，满足检定要求，为病毒载体、外泌体等产品的规模化生产提供了可靠支撑。
随着基因编辑、个体化治疗与自动化技术的深度融合，细胞治疗工艺将向更封闭、更集成、更可追溯的方向发展。同腾新创Ad60 FBR凭借其在封闭系统内的高效扩增与回收能力，将持续为细胞治疗的商业化生产提供可靠、可落地、可放大的工艺解决方案，助力行业实现从研发到产业化的关键跨越。
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